Differential diagnostic signs of anaplasmosis in animals

Blyumenkrants Dmitry Alekseevich Postgraduate at the Department of Veterinary Medicine, Moscow State University of Food Production 109316, Russia, Moskovskaya oblast', g. Moscow, ul. Talalikhina, 33, aud. 340 Blumenkrantsda@gmail.com

Актуальность работы. В настоящее время в условиях обеспечения стабилизации отрасли животноводства важной задачей является снижение падежа и поддержание высокого уровня репродуктивности животных. Одним из факторов, вызывающих гибель высокопродуктивных сельскохозяйственных животных и снижения репродуктивной способности является анаплазмоз ^[4,17].

Анаплазмоз – трансмиссивное заболевание, возбудителем которого является внутриклеточный микроорганизм рода Anaplasma, отряда Riсkettsiales, семейства Anaplasmatacеa. Основными клиническими признаками данного заболевания является анемия, прогрессирующее исхудание, снижение продуктивности и нарушение воспроизводительной функции животных. Распространение данного заболевания напрямую связано с ареалом обитания клещей семейства иксодовых, аграсовых и кровососущих насекомых – переносчиков возбудителя анаплазмоза ^[14,9].

Наличие благоприятных природно-климатических условий, нарушение или невыполнение инструкций по проведению плановых ветеринарных мероприятий обусловливают широкое распространение заболевания, нанося значительный экономический ущерб животноводству. Снижение хозяйственной и племенной ценности приводит к вынужденному убою и выбраковке животных, увеличивая общие экономические потери хозяйств от анаплазмоза ^[2,3].

Цель работы – изучение дифференциально-диагностических признаков анаплазмоза животных.

Обзор литературы. Заболевание регистрируется во многих странах мира, в частности странах Балтии, Средней Азии, Латинской Америки, при исследовании 1161 образца крови сельскохозяйственных животных процент положительных реакций на анаплазмоз составил: в Турции - 31,4%, в Ираке - 66,6%, Судане – 41,6%, в Португалии - 82,5% ^[19].

При исследовании 2500 образцов крови у жвачных животных Северных регионов Китая, средняя распространенность моноинфекции у каждого вида составляла 17,6% (A. phagocytophilum), 4,8% (A. bovis) и 40,5% (A. ovis). В ассоциативной форме заболевание обнаруживалось у 8,0% животных ^[20].

В северной части республики Таджикистан из общего числа образцов крови крупного рогатого скота (1110 мазков) возбудитель, в форме моноинфекции анаплазмоз обнаружен у 15,4%, в смешанной инвазии у 29,2% исследуемых животных, отношение анаплазмоза к общей заболеваемости в республике составило 44,6 % случаев ^[6].

В соответствии с данными «О состоянии эпизоотической обстановки в РФ и предпринимаемых противоэпизоотических мероприятиях по недопущению массовых заболеваний сельскохозяйственных животных» неблагополучными по анаплазмозу являются южные области России, Брянская, Калужская, Рязанская, Калининградская, Саратовская, Тверская, Тюменская, Владимирская, Нижегородская, Новосибирская и Ульяновская области, Алтайский край ^[16].

Экстенсивность инвазии варьирует от 1,54% до 46,9%, не зависимо от ареалов обитания и способов содержания сельскохозяйственных животных, свидетельствуя о постоянном наличии анаплазм в переносчиках возбудителя – кровососущих членистоногих, что обеспечивает высокие показатели циркуляции и инвазивности продуктивных животных в хозяйствах ^[10].

Отличительными чертами анаплазмоза является сезонность и природная очаговость, что обусловлено переносчиками возбудителя – клещами, семейства иксодовых и аграсовых. На ряду с этим, длительная, иногда пожизненная циркуляция возбудителя анаплазмоза в организме переболевшего животного – анаплазмоносительство, при условии снижения резистентности организма предрасполагает к рецидивам. Высокие показатели инвазивности анаплазмами могут быть обусловлены церкуляцией в регионе возбудителей других инфекционных заболеваний, таких как хламидиоз, лептоспироз, сальмонеллез и др., снижая иммунную резистентность здоровых и переболевших животных, приводя к проявлению заболевания в ассоциативной форме ^[11].

Наличие в неблагополучных регионах большого количества кустарников, сорняков, необработанных пастбищ служит благоприятными условиями для развития переносчиков возбудителя, распространение анаплазмоза обусловливают природно-климатические и географические особенности региона ^[1].

Географическое расположение северных регионов в лесостепной и подтаёжных зонах обеспечивает высокий показатель средней заражённости животных, при среднем количестве неблагополучных районов севера ^[2].

Источником возбудителя анаплазмоза служат заражённые и больные животные. Возбудитель может передаваться механическим путём от зараженных животных к здоровым через нестерильные инструменты при проведении зоотехнических мероприятий ^[14].

Пики заболеваемости животных анаплазмозом в независимости от региона совпадают с пиком нападения клещей-переносчиков семейства аграсовых и иксодовых – первичный пик нападения приходится на весну с 13 – 15 мая (с момента начала пастбищного периода) со вторым пиком 10 – 14 июня ^[3].

Сезонность заболевания отражается в неодинаковом проявлении клинических признаков на протяжении года. Данная особенность обусловлена различными климатическими условиями регионов, выражающихся в различных показателях температур, напрямую влияющих на активность клещей – переносчиков возбудителя и перехода от стойлового периода содержания к пастбищному.

Наблюдения за больными и переболевшими животными свидетельствуют о сложности патогенеза и эпизоотического процесса при анаплазмозе животных ^[8]. Анаплазмоз протекает в форме моноинфекции, но и может принимать ассоциативную форму, при такой форме течения клинические признаки проявляются более выражено, форма заболевания более тяжелая, у беременных животных может вызывать аборты. Снижение резистентности организма, обусловленное внешними факторами или другими заболеваниями при анаплазмоносительстве, вызывают активизацию условно – патогенной микрофлоры, которая на ранних сроках развития заболевания подавляет естественные защитные факторы, снижая общий фон иммунологических показателей ^[5].

В неблагополучных районах низкая интенсивность инвазии приводит к течению заболевания в субклинической форме, анаплазмоносительство может продолжаться длительный период, включающий в себя пожизненную инвазивность анаплазмами, что при условии снижения общей резистентности организма может вызывать спорадические случаи проявления клинических признаков острого течения заболевания ^[1].

В целях дифференциальной диагностики анаплазмоза сельскохозяйственных животных используют такие методы: микроскопические, серологические и молекулярно-биологические. Серологические методы, основанные на использовании реакции антител - антигена возбудителя анаплазмоза, имеют недостаточно высокую чувствительность и не позволяют дифференцировать А. marginale от непатогенных для крупного рогатого скота видов анаплазм ^[16]. К наиболее чувствительным методам серологической диагностики анаплазмоза относят ИФА и РНГА. Зачастую диагностика данного заболевания с помощью серологических методов затруднительна. Своеобразная мелкозернистая точечная форма возбудителя, наличие в эритроцитах здоровых животных различного рода включений (телец Жолли и др.) могут приводить к постановке ложных диагнозов ^[12].

Экспериментальные исследования по изучению возможности применения РНИФ в качестве диагностического теста при анаплазмозе крупного рогатого скота, позволило установить возможность использования данной серологической реакции, для обнаружения антител в крови инфицированных и подозреваемых в заражении возбудителем анаплазмоза животных. Анализ результатов исследований показал, что реакция непрямой ИФА, является эффективным диагностическим тестом для обнаружения возбудителя анаплазмоза крупного рогатого скота в клещевом материале, выявляя при этом до 45±11,1 - 50±15,8% заражённых особей ^[2].

РНГА является простым и наиболее чувствительным по сравнению с РДСК методом. В России данный метод впервые применил Х. Георгиу при анаплазмозе крупного рогатого скота и овец, используя антигены, употребляемые в реакции связывания комплимента. В результате при проведении РНГА гемагглютинирующие антитела выявлялись в среднем на 5 дней раньше, чем комплементсвязывающие и почти одновременно с появлением анаплазм в мазках периферической крови. РНГА является чувствительным тестом для диагностики анаплазмоза и выявляет его в более ранние сроки в сравнении с РДСК ^[12].

Сравнительная оценка РНИФ, РНГА и световой микроскопии позволяет сделать вывод о преимуществе первых двух тестов, из которых наиболее чувствительной реакцией является РНИФ - 90,5%, несколько ниже - 90% РНГА, световая микроскопия - 86% РНИФ и РНГА являются более технологичными по отношению к световой микроскопии и могут применяться единовременно с проведением массовых серологических исследований крупного рогатого скота на бруцеллез, лейкоз и другие инфекционные болезни ^[7].

Метод РДСК широко применяют в лабораторной диагностике анаплазмоза. Его недостатком является непостоянное выявление комплементсвязывающих антител у анаплазмоносителей. Антиген для реакции получают из крови сплен-эктомированных животных, зараженных анаплазмозом Установлена прямая корреляционная зависимость между высоким уровнем паразитемии у животного с высоким титром получаемого антигена ^[12].

При сравнении результатов применения метода РДСК отмечено начало выявления комплементсвязыпамцих антител у телят в среднем на 20-25 день после заряжения, титры антител составляют - 1:5. Далее происходит повышение уровня титра антител и к 30-45 дню достигает своего максимума - от 1:40 до 1:320. После этого выявляется постепенное снижение уровня антител и к 65-75 дню после заражения, наблюдаясь, в среднем, в разведении сыворотки -1:10 до 1:20. С целью выявления комплементевязнвающих антител проводимое микроскопирование мазков крови у телят для установления сроков появления анаплазм в периферической крови показало несовпадение обнаружения анаплазм с появлением комплементсвязывающих антител. Анаплазмы в мазках периферической крови появляются на 10 дней раньше, чем комплементсвязывающие антитела в сыворотках крови у телят. Часто пик комплементсвязывающих антител наблюдается после угасания паразитемии и начала восстановления крови ^[13].

Более быстрая и точная диагностическая информация получена с помощью выявления ДНК анаплазм в крови сельскохозяйственных животных при момощи ПЦР. Преимуществом полимеразной цепной реакции является высокий уровень чувствительности и специфичности, позволяя обнаружить анаплазм на ранних этапах развития заболевания, включая латентную фазу и с наибольшей долей вероятности дифференцировать возбудителя анаплазмоза от других сходных по клиническому проявлению болезней животных ^[16]. Чувствительность метода позволяет выявить 100 копий гена msp4 A. marginale и более. Проведенные испытания свидетельствуют о 100%-ной повторяемости и воспроизводимости метода ПЦР ^[8].

Решающим в постановке диагноза является положительный результат микроскопических исследований мазков периферической крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Результаты микроскопических исследований мазков крови могут быть недостоверны на ранних стадиях течения заболевания и в случаях заболеваний, сопровождающихся тяжелой формой анемии ^[16]. Анаплазмы в мазках обнаруживаются, как круглые, размером 0,2 - 1,2 мкм эритроцитарные включения. Зачастую возбудитель обнаруживается в лейкоцитах и тромбоцитах, в форме округлых образований почти темного цвета. Анаплазмы занимают преимущественно переферическое, реже – центральное положение в эритроцитах. Один эритроцит может содержать от одного до четырёх возбудителей ^[8].

При дифференциальной диагностике анаплазм, необходимо учитывать культуральные свойства возбудителя. На вторые - третьи сутки выращивания на культуре клеток Vero, наблюдаются дегенеративные изменения восприимчивых клеток, обнаруживалось изменеие клеточной структуры характеризующеся истончением клеточных мембран. Анаплазмы поражают не только цитоплазматическое пространство, но и проникая в клеточное ядро, разрушают ядерную оболочку ^[2].

Выводы. Анализируя данные литературы можно сделать вывод, что установлено широкое распространение инвазирования сельскохозяйственных животных возбудителями рода Anaplasma. Хроническое течение и паразитоносительство отмечено как основная форма течения заболевания. Экстенсивность инвазии варьирует от 1,54% до 46,9%, не зависимо от районов обитания и способов содержания животных, что свидетельствует о стабильном наличии анаплазм в кровососущих членистоногих, обусловливая высокие показатели циркуляции возбудителя в хозяйствах. Решающим в диагностике анаплазмоза является положительный результат микроскопических исследований мазков крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Серологические методы являются основными для видовой идентификации анаплазм. При этом одной из наиболее значимых является реакция иммунофлюоресценции.